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人的幽门螺杆菌IgG(HP IgG)酶联免疫剖析(ELISA)-金沙平台-3016com金沙

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  • 更新日期:2011-04-27 15:13
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具体引见

试剂盒运用说明书
本试剂仅供研讨运用      -金沙9159目标:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相干液体样本中幽门螺杆菌IgG(HP IgG)含量。
实行道理:
    本试剂盒运用单抗原夹心法测定标本中()程度。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中顺次到场(HP IgG),再取HRP符号的抗原联合,构成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经由完全洗涤后加底物TMB显色。TMB正在HRP酶的催化下转化成蓝色,并正在酸的感化下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的幽门螺杆菌IgG(HP IgG)呈正相干。用酶标仪正在450nm波长下测定吸光度(OD值),经由过程尺度曲线盘算样品中人的幽门螺杆菌IgG(HP IgG)浓度。
试剂盒构成
试剂盒构成
      48孔设置
96孔设置
生存
说明书
1份
1份
 
封板膜
2片(48)
2片(96)
 
密封袋
1个
1个
 
酶标包被板
1×48
1×96
2-8生存
尺度品:90ng/L
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8生存
尺度品稀释液
1.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2-8生存
酶标试剂
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8生存
样品稀释液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8生存
显色剂A液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8生存
显色剂B液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8生存
停止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃-3016com金沙-老金沙网址生存
稀释洗涤液
(20ml×20倍)×1瓶
(20ml×30倍)×1瓶
2-8生存
样本处置惩罚及要求
1.血清:室温血液天然凝固10-20分钟,离心20分钟阁下(2000-3000转/分)。细致收集上浑,生存过程中如泛起沉淀,应再次离心。
2.血浆:应凭据标本的要求挑选EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混淆10-20分钟后,离心20分钟阁下(2000-3000转/分)。细致收集上浑,生存过程中如有沉淀构成,应当再次离心。
3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟阁下(2000-3000转/分)。细致收集上浑,生存过程中如有沉淀构成,应再次离心。胸腹火、脑脊液参照执行。
4.细胞培养上浑:检测排泄性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟阁下(2000-3000转/分)。细致收集上浑。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度到达100万/ml阁下。经由过程重复冻融,以使细胞损坏并放出细胞内成份。离心20分钟阁下(2000-3000转/分)。细致收集上浑。生存过程中如有沉淀构成,应再次离心。
5.构造标本:切割标本后,称与重量。到场一定量的PBS,PH7.4。用液氮敏捷冷冻生存备用。标本熔化后仍旧连结2-8的温度。到场一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充裕。离心20分钟阁下(2000-3000转/分)。细致收集上浑。分装后一份待检测,其他冷冻备用。
操纵步调
1.         尺度品的稀释取加样:正在酶标包被板上设尺度品孔10孔,正在第一、第二孔平分别加尺度品100μl,然后正在第一、第二孔中加尺度品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl离别加到第三孔和第四孔,再正在第三、第四孔离别加尺度品稀释液50μl,混匀;然后正在第三孔和第四孔中先各与50μl弃失落,再各取50μl离别加到第五、第六孔中,再正在第五、第六孔平分别加尺度品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl离别加到第七、第八孔中,再正在第七、第八孔平分别加尺度品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔平分别与50μl加到第九、第十孔中,再正在第九第十孔离别加尺度品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃失落。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度离别为60 ng/L,40 ng/L ,20 ng/L,10 ng/L,5 ng/L)。
2.         加样:离别设空缺孔(空缺对比孔不加样品及酶标试剂,其他各步操纵雷同)、待测样品孔。正在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终究稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,只管不触及孔壁,悄悄晃悠混匀。
3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.         配液:将30(48T的20倍)倍稀释洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.         -3777.com洗涤:警惕揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,云云反复5次,拍干。
6.         加酶:每孔到场酶标试剂50μl,空缺孔除外。
7.         温育:操纵同3。
8.         洗涤:操纵同5。
9.         显色:每孔先到场显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,悄悄震动混匀,37℃避光显色15分钟.
10.     停止:每孔加停止液50μl,停止回响反映(此时蓝色坐转黄色)。
11.     测定:以空缺空调整,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 测定应正在加停止液后15分钟之内停止。
注意事项:
1. 试剂盒从冷藏情况中掏出应正在室温均衡15-30分钟前方可运用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中生存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可正在水浴中加温助溶,洗涤时不影响效果。
3. 各步加样均应运用加样器,并常常校正其准确性,以制止实验偏差。一次加样工夫最好掌握正在5分钟内,如标本数目多,推荐运用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做尺度曲线,最好做复孔。如标本中待测物资含量过高(样本OD值大于尺度品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释肯定倍数(n倍)后再测定,盘算时请最初乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性运用,以制止交织净化。
6. 底物请避光生存。
7. 严厉根据说明书的操纵停止,实验效果判断必需以酶标仪读数为准.
8. 一切样品,洗涤液和种种废弃物都应按沾染物处置惩罚。
9. 本试剂差别批号组分不得混用。
10. 如取英文说明书有同,以英文说明书为准。
3016com金沙盘算:
以尺度物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,   
正在坐标纸上绘出尺度曲线,凭据样品的OD     
值由尺度曲线查出响应的浓度;再乘以稀释      
倍数;或用尺度物的浓度取OD值计算出标      
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值      
代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释      
倍数,即为样品的现实浓度。                  
                                             
(此图仅供参考)
试剂盒机能:
1.样品线性回归取预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内取批睹应分别小于9%和11%
 
检测局限:                                              
3 ng/L -70 ng/L                                         
                           
生存前提及有效期:
1.试剂盒生存:;2-8
2.有效期:6个月

 
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